Xtimate® Sugar-Ca色譜柱采用鈣化的聚苯乙烯/二乙烯基苯填料的色譜柱。主要用于分析糖類產(chǎn)品，甜菜，甘蔗，淀粉這些作物在水解過(guò)程中的產(chǎn)物，以及用來(lái)做糖產(chǎn)品的質(zhì)量檢測(cè)，能夠?qū)⑵咸烟恰⒐恰Ⅺ溠刻恰Ⅺ溠慷嗵菑牡湫偷挠衩滋菨{中的高聚物中分離出來(lái)，也可用于酒精的發(fā)酵過(guò)程中跟蹤監(jiān)控發(fā)酵糖的減少和酒精的產(chǎn)生。

使用步驟
1. 用兩通取代色譜柱將儀器連接，用過(guò)濾好的超純水沖洗儀器50ml；
2. 再用分析流動(dòng)相沖洗儀器50ml，將流速降到0ml/min；
3. 將Xtimate® Sugar-Ca色譜柱連接在HPLC系統(tǒng)上；
為了保證新柱子及長(zhǎng)時(shí)間未使用的柱子能在分析使用之前得到足夠的鈣離子的平衡，我們推薦使用以下程序：
1) 用至少100ml的0.001M EDTA鈣鹽（500mg/L）溶液在85℃用
0.2ml/min流速反沖柱子；
2) 將柱子用分析所用流動(dòng)相沖柱子。
4. 設(shè)置流速在0.2-0.3ml/min直到柱溫達(dá)到設(shè)定值；
5. 在柱溫達(dá)到設(shè)定值時(shí)，流速增至分析流速，流速變化以0.1ml/min為增量，待反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速。zui大流速不應(yīng)使壓力超過(guò)2000psi。

流動(dòng)相要求
此色譜柱由鈣基樹脂填裝而成，氫離子和其它離子會(huì)取代鈣離子，或是引起與柱中糖的置換，尤其是像蔗糖這樣易于置換的糖。因此推薦在流動(dòng)相中加入一定量的鈣離子來(lái)保持平衡和防止與樣品的置換。推薦的流動(dòng)相用去離子的無(wú)菌水，含EDTA鈣鹽約0.0001M（50mg/L）。水應(yīng)去離子化，大于2兆歐的電阻率，水中應(yīng)不含多價(jià)離子 ，尤其是過(guò)渡金屬元素和重金屬離子。使用前需用真空泵通過(guò)0.45μm或更小孔徑的濾膜除去細(xì)菌和其它顆粒，溶劑過(guò)濾推薦使用溶劑過(guò)濾器。雖然流動(dòng)相已經(jīng)在真空過(guò)濾時(shí)脫氣，但還是應(yīng)該通過(guò)以下程序來(lái)*脫氣。如果系統(tǒng)連續(xù)使用不止一天，請(qǐng)將流動(dòng)相置于錐形瓶中，放在攪拌器/電爐上，用鋁箔封上瓶口以減小蒸發(fā)，用前將流動(dòng)相加熱至沸點(diǎn)幾分鐘，使用時(shí)保持溫度70-90℃。這個(gè)操作能夠保證氣體（尤其是CO2）不再重新溶解在流動(dòng)相中，同時(shí)也會(huì)防止微生物的滋生。要保持裝流動(dòng)相的容器干凈，有蓋，且新鮮，流動(dòng)相需每24小時(shí)重新配制。

注意事項(xiàng)
通常推薦壓力不超過(guò)2000psi；
zui大流速不超過(guò)2ml/min（70℃）；
流動(dòng)相中有機(jī)相的zui大含量為5%(V/V)，樣品中少量的乙腈，乙醇，甲醇和異丙醇不會(huì)影響柱子的性能；
柱子的溫度不要超過(guò)95℃。通常高溫會(huì)帶來(lái)高的分辨率，但在90-95℃之間幾乎沒(méi)有變化，70℃以下對(duì)于許多糖，就異構(gòu)體的分離來(lái)說(shuō)不能提供足夠的分辨率，對(duì)于乙醇的定量，柱溫應(yīng)在75℃；
柱溫的快速變化不會(huì)對(duì)柱子帶來(lái)什么反作用，如果柱子在60℃以下，那么太高的流速會(huì)引入高柱壓，由于水在低溫時(shí)有高的粘度因此高的流速會(huì)帶來(lái)很高的反壓；
定期反向沖洗色譜柱（在每5L流動(dòng)相之后），這將會(huì)有效地延長(zhǎng)色譜柱的壽命；
流速的變化不能超過(guò)0.5ml/min，流速變化應(yīng)該緩慢進(jìn)行，建議改變流速時(shí)以0.1ml/min為增量，直到反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速。任何的流速變化均要在不超過(guò)0.5ml/min下進(jìn)行；在溶劑輸出系統(tǒng)中壓力限制的設(shè)定應(yīng)比普通的工作壓力高出幾百psi，從而避免任何儀器未被注意的額外壓力升高。

保存條件
長(zhǎng)期保存（72小時(shí)以上不用）。關(guān)掉柱溫箱，待柱溫冷卻到室溫，停泵。當(dāng)柱子冷卻，從系統(tǒng)中移出，換上起初隨柱子的堵頭，柱子在保存過(guò)程中要防止揮干，通常的流動(dòng)相都可作為保存柱子的適宜溶劑，在冰箱中5℃保存（不要冷凍），以防止微生物的滋生；長(zhǎng)期保存可以使用10%乙醇作為保存溶劑。柱子拆掉后要用兩通裝在系統(tǒng)上，沖洗整個(gè)液相色譜系統(tǒng)先用水，然后用甲醇，zui后儀器系統(tǒng)保存在甲醇中。

在關(guān)機(jī)后的重新啟動(dòng)。當(dāng)開啟帶有一個(gè)柱溫很低的柱子的系統(tǒng)時(shí)，打開柱溫箱，流速開始不要超過(guò) 0.2ml/min。待系統(tǒng)在此條件下穩(wěn)定至少二十分鐘達(dá)到工作溫度后再按通常的工作條件操作。

整夜的停機(jī)（放置少于72小時(shí)）。柱子留在系統(tǒng)中流速降到0.2ml/min。循環(huán)溶劑，將流出的管路插入流動(dòng)相瓶中，如果不想開著柱溫箱，那就關(guān)掉泵和柱溫箱讓其冷卻。

在整夜停機(jī)后的開啟。打開柱溫箱，流動(dòng)相的流速不要超過(guò)0.1-0.2ml/min，保持此流速至少二十分鐘直到達(dá)到柱子工作所需溫度，然后再按照通常分析條件來(lái)設(shè)置。

故障檢查
Sugar-Ca色譜柱是以樹脂的膨脹形態(tài)緊密裝填的，如果樣品進(jìn)行了很好的前處理，那么大部分產(chǎn)生的問(wèn)題都和樹脂填料有關(guān)，由于單向閥的損壞或是突然地反壓增加，脆弱的樹脂填料可能被泵的波動(dòng)沖到柱子的后篩板處。反壓的增加是否會(huì)發(fā)生，要經(jīng)常檢查在線過(guò)濾器以及保護(hù)柱中是否截留了微粒。如果不是此問(wèn)題，那么很可能是樹脂部分地堵在了出口端的篩板處，檢查這種情況是否發(fā)生需要關(guān)掉泵，將柱子的流路方向反過(guò)來(lái)，然后泵流速開到0.1ml/min，20分鐘達(dá)到工作溫度后再設(shè)至工作時(shí)的流速。
 

柱子的再生步驟
Sugar-Ca色譜柱的再生方法根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化，越是天然物（尤其是含有那些重金屬和過(guò)渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品），越需要經(jīng)常地對(duì)柱子進(jìn)行再生，因?yàn)樗鼈儠?huì)與柱子發(fā)生置換。可以通過(guò)注射蔗糖來(lái)測(cè)試柱子的置換情況。
如果蔗糖的峰有拖尾，那么柱子需要做以下處理:
配制500ml的再生溶液(Ca EDTA 500mg/L)，把柱子流路方向反過(guò)來(lái)，在90℃下以0.5ml/min的流速?zèng)_洗一整夜。再生之后回到正常方向使用。
當(dāng)柱子反沖時(shí)很重要的一點(diǎn)是需要保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗，用冷的溶劑將會(huì)延緩沖洗的過(guò)程。