酸性紅1 是一種工業染料，它有4個別名：偶氮熒光桃紅、偶氮焰紅，酸性紅G，食品紅10。

它的長相是這樣的：

哇！！一看就不是什么能吃的東西啊！

然而，就是有一些不法商販會在食品中添加酸性紅1，目前我國尚無相關的檢測標準。月旭科技親自采購了酸性紅1標準品，從各大超市采購紅酒、紅棗、火腿腸、酸奶作為實際樣品，開發出食品中酸性紅1檢測的方法。該方法快速，靈敏度高，重現性好。

適用范圍

適用于紅酒、紅棗、火腿腸、酸奶等基質中酸性紅1的檢測。

參考標準：《GB 5009.35-2016 食品安全國家標準食品中合成著色劑的測定》

目前酸性紅1還沒有具體的標準，我們根據GB 5009.35-2016的方法，優化了提取步驟，使樣品在過PA小柱后，回收率高，凈化效果好，方法穩定性好。

 相關試液的配置

 1）準確稱取酸性紅1標準品50mg，用10%甲醇水溶液溶解并定容到50mL，得到1000μg/mL標準儲備液。

 2）準確移取酸性紅1標準儲備液 1000μg/mL 5mL，用10%甲醇水溶液稀釋并定容到50mL，得到10μg/mL標準使用液。

 3）提取液A配置：取100mL乙醇，50mL乙腈互溶；然后取其中140mL乙醇：乙腈（2：1）混合液，加入60mL水和2mL的氨水。

 4）檸檬酸溶液：稱取 20g 檸檬酸（C6H8O7·H2O），加水至 100mL，溶解混勻。

 5）pH=6 的水：500ml的水加檸檬酸溶液調節至 pH 到 6，如果水pH偏低于6可以直接使用。

 6）pH=4的水:500ml的水加檸檬酸溶液調節至 pH 到 4。

 7）甲醇：甲酸（6：4）：取甲醇150mL+甲酸100mL。

 8）洗脫劑：先取2mL的氨水定容至100mL成為2%的氨水溶液；再用20mL的2%氨水溶液加70mL乙醇加10mL水。

 9）10%甲醇：10mL甲醇加90mL水。

乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經0.45μm濾膜過濾。

 提取步驟

 一、紅酒    

取1mL樣品加入0.3mL甲酸，振蕩，待凈化。

  二、紅棗

（1）將1.000g樣品置于50mL 離心管，加入20mL提取液A，振蕩2min，60℃水浴超聲10min，6000rpm下離心2min，收集上清液；

 （2）再向下清液加入提取液A10mL，振蕩2min，水浴超聲10min，6000rpm下離心2min，收集上清液；

 （3）重復（2）的過程。收集3次上清液，再次6000rpm下離心2min（為了使上清液固體顆粒減少，從而加快上樣等步驟）；

 （4）在40℃水浴條件下，減壓蒸至約12mL，再加3mL甲酸混勻，待凈化。

 三、火腿腸

（1）將1.000g樣品置于50mL 離心管，加入1.0gC18粉末，加入20mL提取液A，振蕩2min，60℃水浴超聲10min，6000rpm下離心2min，收集上清液；

 （2）再向下清液加入提取液A10mL，振蕩2min，水浴超聲10min，6000rpm下離心2min，收集上清液；

 （3）重復（2）的過程。收集3次上清液，再次6000rpm下離心2min（為了使上清液固體顆粒減少，從而加快上樣等步驟）；

 （4）在40℃水浴條件下，減壓蒸至約12mL，再加3mL甲酸混勻，待凈化。

 四、酸奶

（1）將1.000g樣品置于50mL 離心管，加入20mL提取液A，振蕩2min，60℃水浴超聲10min，6000rpm下離心2min，收集上清液；

 （2）在40℃水浴條件下，減壓蒸至約7mL左右，再加1.5mL甲酸混勻，待凈化。

 SPE凈化步驟

 SPE柱：月旭Welchrom? PA(聚酰胺)小柱，規格：1000mg/6mL。

 a）活化：加入5mL甲醇活化 Welchrom? PA柱，5mL水，5mL pH=6的水，棄去流出液。

 b）上樣：將提取液加入 Welchrom? PA柱中，棄去流出液，注意不要讓小柱溶劑流干。

 c）淋洗：依次用10mLpH=4的水，20mL甲醇：甲酸（6：4），10mLpH=7的水淋洗，棄去流出液。

 d）洗脫：用15mL 2%氨水：乙醇：水（2+7+1）洗脫，收集流出液，壓干小柱。

 e）濃縮：將收集的洗脫液在80℃水浴蒸干，再用10%甲醇水復溶并定容至2mL。

 色譜條件

色譜柱：月旭Ultimate XB-C18（4.6 x 250mm, 5μm）
流動相：乙酸銨/乙腈梯度

流速：1.0mL/min
進樣量：20μL
柱溫：30oC
檢測波長：534nm

 色譜圖或者加標回收率結果

圖1：酸性紅1標準品0.5mg/L

圖2：酸性紅1-紅酒加標10mg/kg

圖3：酸性紅1-紅棗加標1mg/kg

圖4：酸性紅1-火腿腸加標1mg/kg

圖5：酸性紅1-酸奶加標1mg/kg

表1：加標回收率測定結果

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